《核酸实验室建设》作者： 李文杰摘要： 随着医学科学的发展，分子生物学技术的应用越来越广泛。目前临床检验中常用的核酸包括dna、rna和蛋白质等，而用于检测的主要是dna。在核酸检测中，由于技术手段的不同及对结果的要求不同，其操作过程也各不相同。本文主要介绍几种常见的技术方法及其各自的特点和应用范围。

1.pcr扩增法 pcr（polymerase chain reaction）即聚丙烯酰胺链式反应，是体外扩增基因的一种常用技术。该技术在20 世纪60年代开始应用于临床检验工作，70年代以来发展迅速，20世纪80年代末已进入大规模应用阶段；目前已成为分子诊断学中的常规技术之一。 pcr的原理是将待测标本中的dna片段用特异性的引物进行标记后加入到含有模板dna的缓冲液中进行聚合酶反应以获得大量的目的产物-探针mrna（tag）。然后根据需要将探针与靶序列进行杂交或直接测定靶序列上的特定核苷酸含量来判定是否发生了突变或者修饰变异从而做出相应的判断和处理措施[1] 。

2.荧光定量pcr 荧光定量pcr（q antitative q antitive pcr）是在普通定性pcr的基础上发展起来的新的定量分析手段和方法[2] 。它通过使用特异性染料使被测标本中的目标蛋白发生颜色变化来反映其在细胞内存在的数量[3] 。该方法具有灵敏度高、重复性好等特点[4] ，是目前国际上最先进的方法之一[5] ，广泛应用于病原微生物感染的诊断和疾病的辅助诊断等方面 [6] 。

3.实时荧光定量pc r 实时荧光定量pc r （real time q antitative pc r）[7] 是在传统实时荧光定量pc r 的基础上结合计算机处理系统研制开发的新一代快速、准确的病毒载量的检测方法 [8] 。该方法采用多组份混合样本预处理方法 [9] 、高灵敏度抗体免疫捕获技术和新型双光子激发体系 [10] 等先进技术 [11] ，能够有效地克服传统实时荧光定量PC R 中存在的问题 [12] ，如假阳性率高 [13] 、灵敏度低 [14] 、试剂盒成本高等缺点 [15] ；同时大大缩短了实验时间和提高实验准确性 [16] ；此外还具备操作简单、自动化程度高 [17] 等优势 [18] 。